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小鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒的酶免分析步驟
發布時間:2020-09-27   點擊次數:144次
   小鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒實驗原理:
  試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被魚組胺(HIS)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成黃色。顏色的深淺和樣品中的魚組胺(HIS)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
 
  小鼠組胺(HIS)ELISA試劑盒的酶免分析步驟:
  1、實驗準備
  預先進行編號,標記標準品和樣品的位置,進行雙孔檢測(每次實驗都須做標準曲線)。
  使用前將所有試劑回升至室溫,取所需數量的微孔條,將多餘板條用試劑盒提供的自封袋重新密封同時排除裏麵空氣,並立即放回2-8℃幹燥保存。
 
  2、分析步驟
  在標準品孔中加入50μl各標準品溶液,在各樣品孔中加入50μl樣本溶液;
  在所有孔中加入50μl的三聚氰胺酶結合物溶液,輕微晃動反應板使之徹底混勻,室溫下溫浴40min;
  甩幹孔中液體,用洗滌工作液洗滌微孔板4-5次,後一次應在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體;
  洗滌程序完成後,立即用微量移液器在每個微孔中先加入50μl底物液A,再加50μl底物液B,輕微晃動使之混勻;
  室溫下溫浴15min,每孔中加入50μl終止液,混勻,在450nm下檢測吸光度,結果在5min內讀取。