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小鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒的酶免分析步骤
发布时间:2020-09-27   点击次数:144次
   小鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒实验原理:
  试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被鱼组胺(HIS)捕获抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的鱼组胺(HIS)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
 
  小鼠组胺(HIS)ELISA试剂盒的酶免分析步骤:
  1、实验准备
  预先进行编号,标记标准品和样品的位置,进行双孔检测(每次实验都须做标准曲线)。
  使用前将所有试剂回升至室温,取所需数量的微孔条,将多余板条用试剂盒提供的自封袋重新密封同时排除里面空气,并立即放回2-8℃干燥保存。
 
  2、分析步骤
  在标准品孔中加入50μl各标准品溶液,在各样品孔中加入50μl样本溶液;
  在所有孔中加入50μl的三聚氰胺酶结合物溶液,轻微晃动反应板使之彻底混匀,室温下温浴40min;
  甩干孔中液体,用洗涤工作液洗涤微孔板4-5次,后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体;
  洗涤程序完成后,立即用微量移液器在每个微孔中先加入50μl底物液A,再加50μl底物液B,轻微晃动使之混匀;
  室温下温浴15min,每孔中加入50μl终止液,混匀,在450nm下检测吸光度,结果在5min内读取。