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氧氟沙星快速检测试剂盒 使用说明书 【原理】 试剂盒采用间接竞争ELISA方法,在微孔条上预包被偶联抗原,样本中的残留物氧氟沙星和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗氧氟沙星抗体,加入酶标记物后,用TMB底物显色,样本吸光值与其所含残留氧氟沙星的含量成负相关,与标准曲线比较即可得出相应残留物氧氟沙星的含量。 【试剂盒技术指标】 规 格:96孔/盒 灵 敏 度: 1ppb 检测时间: 45min 样本定量检测下限: 组 织(高检测限)………………………1ppb 组 织(低检测限)………………………20ppb 样本回收率 组 织…………………………………80±15% 氧氟沙星反应率 氧氟沙星………………………………100% 【试剂盒组成】 1、 微量测试孔:每条8孔,一板12条 2、 标准液×6瓶:(1ml/瓶) 0ppb、1ppb、3ppb、9ppb、27ppb、81ppb 3、 高浓度标准品溶液×1瓶:(1ml/瓶) 1ppm 4、 酶标记物 7ml……………………………红色帽 5、 抗体工作液 7ml……………………………绿色帽 6、 底物A液 7ml……………………………棕色帽 7、 底物B液 7ml……………………………黑色帽 8、 终止液 7ml……………………………黄色帽 9、 20X浓缩洗涤液40ml ……………………………白色帽 10、 2X浓缩复溶液 50 ml ……………………………蓝色帽 【所用仪器、试剂】 具备的仪器:微孔酶标仪、打印机、均质器 、氮气吹干装置、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g) 微量移液器:单道20µl-200µl、100µl-1000µl,多道250µl 试 剂:二氯甲烷、正己烷、乙腈. Na2HPO4·12H2O、NaH2PO4·2H2O、 【实验前溶液配制】 样本处理前需配制: 配液1、乙腈-二氯甲烷混合溶液 V乙腈-V二氯甲烷 = 1 : 4 配液2、PH7.2 0.02MPB缓冲液 5.16gNa2HPO4·12H2O+0.87g NaH2PO4·2H2O 加去离子水1L溶解。 配液3、用去离子水将2X浓缩复溶液按1:1稀释 (1份浓缩复溶液+1份去离子水)用于样本复溶。 配液4、将40ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水按照1:19稀释 (1份浓缩洗涤液+19份去离子水),或按所需用量配制洗涤液。 【样本前处理方法】 样本前处理须知:处理任何样本时,都必须注意: (a)本试剂盒所检测的组织样本包括:动物组织、 禽类和水产组织。eg:鸡、鸭、牛、兔、鱼、虾等。 (b)实验中必须使用一次性吸头,吸取不同的试剂时要更换吸头 (c)实验之前须检查各种实验器具是否干净,必要时可对实验器具进行清洁,以避免污染干扰实验结果。 样本前处理步骤 (a)动物组织样本 1、称2.0±0.05g 均质样本于50ml离心管中; 2、加入乙腈-二氯甲烷混合溶液8ml,振荡5min,4000r/min以上, 离心10min; 3、取4ml清澈有机相至干燥溶器中,65℃氮气吹干/旋转蒸发至干; 4、用1ml稀释后的复溶液溶解干燥的残留物,加入正己烷1ml混合 30s,4000r/min以上,15℃离心5min; 5、去除上层取下层50µl液体用于分析。 样本稀释倍数:1 (b) 动物组织低检测限处理方法二
2、取50µl液体用于分析。 样本稀释倍数:20倍 【酶标免疫分析程序】 操作步骤:
【结果判定】 结果判定有两种方法,粗略判定可用第1种方法,定量判定用第2种方法。注意样本吸光值与氧氟沙星的含量成负相关。 1、粗略判定 用样本的平均吸光度值与标准品比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本1的吸光度值为0.238, 样本2的吸光度值为0.946,标准液吸光度值分别是:0ppb为1.745;1ppb为1.502;3ppb为1.160; 9ppb为0.735;27ppb为0.336; 81ppb为0.176。则样本1的浓度范围是27ppb-81ppb;样本2的浓度范围是3ppb-9ppb。乘以其对应的稀释倍数即为样本中氧氟沙星的实际浓度。 2、定量分析 (1)百分吸光率的计算,标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值(双孔)除以第1个标准(0标准)的吸光度值,再乘以100%,即
B—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值 (2)标准曲线的绘制与计算 以标准品百分吸光率为纵坐标,以氧氟沙星标准品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标,绘制标准曲线图。将样本的百分吸光率代入标准曲线中,从标准曲线上读出样本所对应的浓度,乘以其对应的稀释倍数即为样本中氧氟沙星的实际浓度。 若利用试剂盒专业分析软件进行计算,更便于大量样本的准确、快速分析。 3、标准准曲线: B/B0 (%)
1 3 9 27 81 (ppb) [µg/kg] 图1:氧氟沙星检测试剂盒的回归曲线 4、再现性: %CV
0 1 3 9 27 81 (ppb) [µg/kg] 图2:氧氟沙星检测试剂盒的精密度 由多个不同的实验结果确定了精密度,图2显示出氧氟沙星检测试剂盒的精密度情况,获得的标准吸收值的变异系数(%CV)对相应氧氟沙星浓度作曲线,可以看到在全部范围内变异系数如此之低,可以得到很好的再现性。 【注意事项】
【储存】 原包装应储存于2~8℃保鲜冷藏,切勿冷冻。 【有效期】 有效期12个月;生产日期、有效期、生产批号见外包装. |
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