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小鼠穀氨酰胺(Gln)ELISA試劑盒的操作流程是怎樣的
發布時間:2020-12-17   點擊次數:40次
   小鼠穀氨酰胺(Gln)ELISA試劑盒是通過丙烯酰胺抗體來檢測丙烯酰胺的。將標準品或者樣品加入到微孔中和包被在微孔底部的抗丙烯酰胺的高親和力抗體發生反應。如果樣品中存在丙烯酰胺,加入HRP(辣根過氧化物酶)標記物將競爭性的與抗體結合。
  包被在板底部的二抗與抗體結合,加入洗液洗去未結合的抗原抗體,加入顯色底物,在酶的作用下顯藍色。顯色顏色的深淺與樣品中丙烯酰胺的量成反比例關係。
  所以,樣品中的丙烯酰胺濃度越高,顯色的藍色將會越淺。加入酸,終止反應,底物顏色由藍色變為棕黃色。微孔板放進酶標儀裏450nm讀數,樣品的吸光度值與試劑盒中標準OD值相比較,相對應得出結果。
 
  小鼠穀氨酰胺(Gln)ELISA試劑盒的操作流程:
  實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫,試劑不能直接在37℃溶解;試劑或樣品配製時,均需充分混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋後的樣品符合試劑盒的檢測範圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。
  1、加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其餘各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣,待測樣品孔中先加樣品稀釋液,然後再加待測樣品。加樣將樣品加於酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
 
  2、溫育:用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾。
 
  3、配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋後備用
 
  4、洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩幹,每孔加滿洗滌液,靜置30秒後棄去,如此重複5次,拍幹。
 
  5、加酶:每孔加入酶標試劑,空白孔除外。
 
  6、顯色:每孔先加入顯色劑A,再加入顯色劑B,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鍾。
 
  7、終止:每孔加終止液,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
 
  8、測定:以空白空調零,波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。測定應在加終止液後15分鍾以內進行。