產品時間:2019-11-23
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雞白痢ELISA試劑盒
實驗原理
雞白痢ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被雞白痢捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育並徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,並在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的雞白痢呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
樣本處理及要求
1. 血清:將收集於血清分離管的全血標本在室溫放置2小時或4℃過夜,然後1000×g離心20 分鍾,取上清即可,或將上清置於-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。
2. 血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標本,並將標本在采集後的30分鍾內於2-8℃ 1000×g離心15分鍾,取上清即可檢測,或將上清置於-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。
3. 組織勻漿:用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)衝洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細胞會影響測量結果),稱重後將組織剪碎。將剪碎的組織與對應體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應9mL的PBS,具體體積可根據實驗需要適當調整,並做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑製劑)加入玻璃勻漿器中,於冰上充分研磨。為了進一步裂解組織細胞,可以對勻漿液進行超聲破碎,或反複凍融。zui後將勻漿液於5000×g離心5~10分鍾,取上清檢測。
4. 細胞培養物上清或其它生物標本:請1000×g離心20分鍾,取上清即可檢測,或將上清置於-20℃或-80℃保存,但應避免反複凍融。
注:標本溶血會影響zui後檢測結果,因此溶血標本不宜進行此項檢測。
需要而未提供的試劑和器材
試劑盒組成
名稱 | 96孔配置 | 48孔配置 | 備注 |
微孔酶標板 | 12孔×8條 | 12孔×4條 | 無 |
標準品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 無 |
樣本稀釋液 | 6mL | 3mL | 無 |
檢測抗體-HRP | 10mL | 5mL | 無 |
20×洗滌緩衝液 | 25mL | 15mL | 按說明書進行稀釋 |
底物A | 6mL | 3mL | 無 |
底物B | 6mL | 3mL | 無 |
終止液 | 6mL | 3mL | 無 |
封板膜 | 2張 | 2張 | 無 |
說明書 | 1份 | 1份 | 無 |
自封袋 | 1個 | 1個 | 無 |
備注:
1. 標準品濃度依次為:24、12、6、3、1.5、0.75 ng/mL
2. 經過大量正常標本檢驗,標本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測範圍內,實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過zui大標準品濃度時,可用樣本稀釋液將標本進行適當稀釋後再進行實驗。
注意事項
試劑準備
試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡後方可使用。
20×洗滌緩衝液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩衝液加19份蒸餾水。
操作步驟
實驗結果計算
以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪製標準曲線,並得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
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